要想取得漂亮的WB條帶，樣品的制備是前提保證，在眾多的提取技術中，蛋白的抽提是最簡單的。蛋白提取不知道比RNA提取簡單多少倍，但是要保證WB條帶的美觀，還是有幾個需要注意的事項，本篇著重介紹一下微量組織如何得到高質量的WB樣品及應用案例。

（1）蛋白抽提

市面上的蛋白抽提試劑多的都數(shù)不過來，無論是什么牌子、什么型號的，基本成分都大同小異，無非就是裂解細胞，抽提蛋白（也有特定細胞器蛋白抽提試劑盒），再配合蛋白酶抑制劑和磷酸酶抑制劑，抽提出組織或細胞中的總蛋白。蛋白酶抑制劑和磷酸酶抑制劑的種類同蛋白抽提試劑一樣都是琳瑯滿目，只要習慣一種的使用就可以了，最好還是蛋白酶抑制劑和磷酸酶抑制劑聯(lián)合使用，但一般普通蛋白用一個PMSF就能解決問題，但如果驗證磷酸化蛋白，就一定要加入磷酸酶抑制劑了。

無論什么抽提試劑，都有一定的抽提效率，一般來說6孔板每孔加入100-200μl抽提試劑，對于組織來說一般每100mg組織加入1-2ml抽提試劑。細胞提取反復吹打幾次就可以了，組織則需要研磨，無論是機械還是超聲都可以，所有的抽提最好都在冰浴上進行。破碎完畢就是離心，一般的離心條件4℃，12000rpm，10min即可。

但在組織蛋白提取中，也應注意臟器組織的部位，例如腎臟組織分為皮質和髓質，腦也有不同區(qū)域的劃分，不是勻質的臟器，不同部位蛋白表達量可能不同，所以提取時一定要按照你的實驗目的去提取特定部位的蛋白，不然得到假陰性結果，都無從下手去分析原因。

此外，對于微量的組織樣本抽提蛋白可能會因為研磨或超聲造成一些損失，以至于得到的蛋白量不足以后續(xù)的實驗。

針對微量組織樣本的蛋白樣品制備，也許你可以試試個技術，它也叫做組織均質器，2-5mg的樣本，讓你3-9S得到蛋白。

（2）應用案例

2020年中國醫(yī)科大學發(fā)表在《Translational lung cancer researsch》雜志上的題為“

PRRX1 isoform PRRX1A regulates the stemness phenotype and epithelial-mesenchymal transition (EMT) of cancer stem-like cells (CSCs) derived from non-small cell lung cancer (NSCLC)”的研究成果，揭示了PRRX1A在肺癌干細胞性和轉移潛能的調控中發(fā)揮重要作用，以及未來在癌癥治療中的潛在應用前景。

在文章的方法部分，提到使用導勝組織細胞消融儀提取蛋白。