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脂滴廣泛存在于動植物細胞、酵母、細菌中,是中性脂的儲存場所,曾被認為是“簡單的,惰性的”細胞內(nèi)含物。但過去20年的研究已經(jīng)從根本上改變了這一觀點?,F(xiàn)在,脂滴被認為是一個復雜且活動旺盛的多功能的細胞器。其復雜的生物發(fā)生和消耗循環(huán)在調(diào)節(jié)細胞代謝、健康和疾病中起到重要的作用。
然而,對于脂滴的動態(tài)變化(大小、含量、數(shù)量、分布)研究手段不足,而且脂滴對 化學標記和光毒性非常敏感,這些因素會影響脂滴的活性和功能。雖然使用受激拉曼散射(SRS)和相干反斯托曼散射(CARS)顯微鏡可以對脂滴進行無標記的觀察,但是,儀器昂貴和操作復雜,并且收到信號特異性和時間分辨的限制。
Nanolive 3D無標記活細胞成像系統(tǒng),因其成像特點,沒有光毒性干擾,超高的分辨率可以對細胞群、單細胞以及亞結(jié)構(gòu)等進行長時間連續(xù)成像觀察?;谥蔚奶攸c和對脂滴研究的需求,Nanolive開發(fā)了Smart Lipid Droplet Assay (SLD),這是用于區(qū)分和量化脂滴動態(tài)變化的無需標記圖像分析解決方案。
兩幅圖像中脂滴的數(shù)量基本一致,使用SLD方法計算出圖像中有277個脂滴,使用FLUO信號計算脂滴得出有249個脂滴。但是,這兩種方法計算出的面積數(shù)據(jù)(Area um2)有很大差異。使用SLD方法計算出的脂滴面積為8.68um,而使用熒光信號計算出的脂滴面積為21.9um。這是由于熒光信號產(chǎn)生的“光圈效應(yīng)”造成的,很難界定單個脂滴的邊緣。
目前,還沒有對無標記(或熒光)圖像進行高級分析的解決方案,這嚴重限制的脂滴動力學的微觀研究。然而,脂滴研究的問題不僅僅是由于缺乏合適的分析工具,而是被目前的成像技術(shù)所限制。Nanolive無標記、無光毒性、長時間成像技術(shù)結(jié)合脂滴分析方法(SLD)可以有效解決這些問題,提高質(zhì)量、數(shù)據(jù)豐富的4D圖像,給細胞代謝,脂質(zhì)存儲和脂滴相關(guān)疾病領(lǐng)域帶來革命性的研究機會。